【作者】杨晓坤,高誉珊,栗晨璐,陈浩天,郭孟玮,谭韵湘,张洋,薛卫国

【摘要】  目的  观察电针对APP/PS1双转基因小鼠老年斑出现前后不同病理阶段自噬状态影响的差异性,从自噬角度探讨电针干预阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)的作用机制。方法  4月龄和8月龄APP/PS1双转基因雄性小鼠各20只,随机分为模型组(4月龄和8月龄模型组)和电针组(4月龄和8月龄电针组),每组10只;以同月龄同性别C57BL/6野生型小鼠为正常组(4月龄和8月龄正常组)各10只。电针组取双侧涌泉穴直刺后接电针仪,百会穴平刺后单向滞针再留针,共20 min。干预隔日1次,共6周。采用Morris水迷宫实验评价小鼠空间学习记忆能力;通过免疫组化技术观察小鼠海马淀粉样斑块沉积情况;用免疫荧光技术观察小鼠海马LC3和 b-淀粉样蛋白(b-amyloid, Ab)表达情况;用酶联免疫吸附法检测小鼠海马Ab表达水平;用Western blot法检测小鼠海马自噬相关蛋白LC3和p62相对表达量。结果  Morris水迷宫结果显示,6月龄和10月龄模型组小鼠平均逃避潜伏期均较同月龄正常组增加(P＜0.01),平台象限停留时间均减短(P＜0.01);与6月龄和10月龄模型组相比,同月龄电针组小鼠平均逃避潜伏期均减少(P＜0.05),平台象限停留时间均延长(P＜0.01)。免疫组化结果显示,6月龄模型组海马区域可见少量老年斑,10月龄模型组海马区域可见大量老年斑。免疫荧光技术结果显示,LC3和Ab阳性表达主要位于海马神经元核周,LC3阳性还表达在细胞突起中。酶联免疫吸附法检测结果显示,同月龄模型组海马Ab水平均高于正常组(P＜0.01);同月龄电针组海马Ab水平均低于同月龄模型组(P＜0.01);  6月龄模型组海马Ab水平明显低于10月龄模型组(P＜0.01)。Western blot法检测结果显示,与同月龄正常组比较,6月龄模型组LC3Ⅱ/Ⅰ比值和p62表达均降低(P＜0.01);与同月龄模型组比较,电针组LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(P＜0.01),p62差异无统计学意义(P＞0.05)。与同月龄正常组比较,10月龄模型组LC3Ⅱ/Ⅰ比值和p62表达均增加(P＜0.01,P＜0.05);与同月龄模型组比较,电针组LC3Ⅱ/Ⅰ比值和p62表达均降低(P＜0.01,P＜0.05)。结论  6月龄和10月龄APP/PS1转基因鼠老年斑出现前后不同病理阶段的自噬状态不同。电针可提高6月龄APP/PS1双转基因鼠海马自噬功能,调节10月龄双转基因鼠自噬功能紊乱状态,电针改善不同病理阶段APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力,降低海马Ab水平的机制存在差异性。