【作者】凌乐乐,王聪,胡寅杰,李冰融,刘鹏,张开勇,李斯雯,刘特,张必萌

【摘要】  目的  观察电针改善高脂高糖诱导的卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)小鼠卵巢功能与调控Hippo/YAP通路的分子机制。方法  将45只C57BL/6雌性小鼠随机分为对照组(wild type, WT)、卵巢早衰组(POF)和电针治疗组(electroacupuncture, EA),每组15只。利用高脂高糖造模成功后,EA组选取关元穴及双侧足三里和三阴交穴进行电针干预。用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察小鼠卵巢病理形态,用马松染色(Masson)观察小鼠卵巢纤维化,用菲律宾染色(filipin)检测小鼠卵巢总胆固醇;采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠血清卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone, FSH)、抗苗勒氏管激素(anti-Müllerian hormone, AMH)、雌二醇激素(estradiol, E₂)、甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein, HDL)和低密度脂蛋白(low-density lipoprotein, LDL)的水平;使用免疫荧光染色标记小鼠卵巢颗粒细胞(granulosa cells, GCs)卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor, FSHR)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和增殖标志物Ki67的水平;用逆转录定量实时荧光定量聚合酶链式反应(reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测Hippo/YAP通路基因YAP、TEAD1、TAZ、MST1、增殖相关基因PCNA、凋亡相关基因BAX、BCL2的mRNA表达;用Western blot法检测Hippo/YAP通路蛋白p-YAP、YAP、TEAD1、TAZ、MST1及凋亡相关蛋白BAX、BCL2的表达。结果  与POF组比较,EA组干预后卵巢卵泡闭锁减少,成熟卵泡增多,卵巢纤维化程度减少,卵巢总胆固醇降低;EA组干预后性激素水平与脂代谢水平显著改善,FSH激素水平显著降低(P＜0.05),AMH和E₂激素水平显著升高(P＜0.05),TG和TC显著下降(P＜0.05),HDL显著上升(P＜0.05),LDL显著下降(P＜0.05);EA组干预后FSHR、PCNA、Ki67表达均上调; EA组干预后激活了Hippo/YAP通路,促进了GCs的增殖与抑制GCs的凋亡。结论  电针可能通过调节Hippo/YAP通路从而改善了卵巢的功能,并且通过Hippo/YAP通路促进了GCs的增殖与抗凋亡水平。